Título:	Estudio inmunohistoquímico del efecto del antagonista de progesterona en glándulas mamarias caninas
Autor(es):	Vaquero, Pablo Guillermo Garcia, Mónica Graciela Lacolla, Daniel Vicente Velez, Carolina Audisio, Santiago Andrés Brizotto, Bruno Corrada, Yanina Torres, Perla Araceli
Fecha de publicación:	7-nov-1919
Revista:	XII Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria
Resumen:	Los tumores mamarios caninos, son los más frecuentes en la perra y el par mamario inguinal es el más comprometido (Chau y col., 2013). Los altos niveles séricos de progesterona, en la fase lútea o perras castradas, favorecen su promoción. Para evaluar la acción del aglepristone, un antagonista de la progesterona, como potencial antitumoral, se utilizaron biopsias de tejido mamario de las glándulas inguinales, donde se analizó la variación de la expresión de los receptores de progesterona (RP) y de KI-67, un marcador de proliferación, con valor pronóstico en neoplasias. Se utilizó una población de 20 perras en fase lútea (progesterona sérica: >2ng/ml; n=20), distribuidas en los protocolos terapéuticos: Aglepristone (Alizine, Virbac), 10 mg/kg/, subcutánea; (AGLE; n=10) o Placebo (PLA, n=10). Se tomaron biopsias bajo anestesia general de mama derecha (día -1; n=20), luego de 15 días, de mama izquierda, con ovarectomía homolateral. Se procesaron por técnica para microscopía óptica y se montaron en portaobjetos positivados Genex®. Para estudiar la expresión de RP y antígeno Ki-67 por inmunohistoquímica (Ramos Vara, 2005), se hidrataron en alcoholes de graduación decreciente. Se lavaron en buffer fosfato salino (PBS), pH 7.4. Se inhibió la peroxidasa endógena con peróxido de hidrógeno 3% en PBS, se realizó la recuperación antigénica en microondas, con buffer citrato 0,01 Molar, pH 6.0 y se lavó con PBS. Se bloqueó la biotina endógena (Avidin-Biotin-blocking-reagents, Cell Marque); y se lavó con PBS. Para bloquear los anticuerpos inespecíficos se incubó con suero equino diluido en PBS (1/100) a temperatura ambiente. Sin lavar, se agregó anticuerpo primario (anti-RP; Pr88, o el antígeno monoclonal Ki-67 NCL Leica), luego se lavó con PBS. Se incubó con anticuerpos secundarios biotinilados, inmunoglobulina anti, anticuerpos de conejo, ratón y cabra (Cytoscan), y se colocó estreptavidina-peroxidasa (Cytoscan), con lavados con el PBS. Se reveló con solución cromógena diaminobenzidina (DAB Sustrate Kit) bajo control de microscopio y corte de coloración con agua corriente. El contraste se obtuvo con hematoxilina activada (Biopur). Se las deshidrató con alcoholes de graduación creciente, y luego en xilol hasta el montaje con Canadax®, Biopur y se observó al microscopio contando inmunomarcaciones de RP y Ki-67, (8 campos a 1000 aumentos). Se calculó el porcentaje de células con inmunoexpresión contando los núcleos positivos (marrones) y negativos de 100 células. Las diferencias de las medias se compararon por test de Student (día -1 vs. 14). El nivel de significancia se estableció en p<0.05. Se realizó la prueba T para dos medias relacionadas. Los valores de progesterona sérica oscilaron entre los 52,15 y 10,74 ng/ml en ambos grupos AGLE y PLA (p<0.05). Durante el tratamiento con aglepristone disminuyó el valor sérico de la progesterona, la diferencia fue significativa (p<0,0001), también se observó disminución de la expresión de receptores de progesterona en tejido mamario de perras (p<0.031) y de la inmunoexpresión de Ki-67 (p<0.0001). El tratamiento con aglepristone evitaría el papel proliferativo de la progesterona a través de sus receptores al disminuir la expresión del marcador de proliferación. También explicaría que la glándula mamaria normal responde a la señal de progesterona y queda condicionada a patrones de expresión de su receptor en un normal desarrollo o podría derivar a procesos tumorales. El modelo es apto para evaluar otros adyuvantes antitumorales en tejido mamario normal. El algepristone es seguro, sin efectos colaterales. Este antiprogestágeno surge como potencial adyuvante en el tratamiento de perras con tumores mamarios y garantiza futuros estudios en la especie.
URI:	http://rid.unrn.edu.ar/handle/20.500.12049/7548
Otros enlaces:	https://www.someve.org.ar/images/revista/2020/Vol101/Pag-15-59_Resumenes-AAIV.pdf
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